支原體是細(xì)胞外生存的最小微生物，是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，大小一般在0.2～0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀，分枝狀等多種態(tài)。

從上面那段話我們可以知道：

1. 支原體存在于我們周圍，他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中。

2. 可透過(guò)一般的濾膜，所以不要寄希望于過(guò)濾可以清除支原體污染的液體。

支原體是一個(gè)可以胞外生長(zhǎng)的細(xì)菌，只要接觸到你的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的任何東西都會(huì)發(fā)生支原體污染。所以細(xì)胞培養(yǎng)的每一步均要小心翼翼。

那支原體應(yīng)該怎么預(yù)防呢？

1. 支原體不耐干燥，所以要保證你的細(xì)胞間通風(fēng)是正常工作的，經(jīng)常清洗filter，保持房間干燥整潔。另外所使用的東西在有液體撒出時(shí)，及時(shí)清理，保證你的瓶子，離心管干燥。

2. 支原體對(duì)熱抵抗力差，所以煮沸或高溫均可以殺滅支原體。提示所有的細(xì)胞用具都要高壓滅菌，所有廢液都應(yīng)該處理。

3. 對(duì)紫外線敏感，所以細(xì)胞間要定期開紫外線。

4. 支原體易被脂溶劑、清潔劑、常用消毒劑，如酒精、酚、甲醛、來(lái)蘇爾等滅活。所以應(yīng)該定期用這些物品清理孵箱，細(xì)胞臺(tái)。在清理孵箱時(shí)不要忘記清理filter。

5. 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該定期殺殺支原體。

因此，在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，定期監(jiān)測(cè)是否存在支原體污染，及時(shí)預(yù)防支原體污染是每個(gè)科研人員的工作之一。下面筆者給您推薦幾個(gè)支原體防控的產(chǎn)品，僅供參考。這些都是德國(guó)Minerva Biolabs公司出品，在國(guó)際期刊上也具有很高的引用率。

一、環(huán)境中的支原體污染的預(yù)防和清除

Mycoplasma OffTM是一款支原體噴霧劑，用于清除工作區(qū)域中的支原體。它起效快（10秒鐘即起效），安全無(wú)毒，對(duì)細(xì)胞不會(huì)產(chǎn)生不良影響，噴灑后，可再用干凈紙張擦拭即可。對(duì)于工作臺(tái)以及各種細(xì)胞操作的器具表面，均可使用。如果是需要避免沾染液體的電子設(shè)備，可使用Mycoplasma OffTM濕巾擦拭。

細(xì)胞孵箱、水浴鍋等有溫水的地方，也容易滋生支原體、細(xì)菌等。在循環(huán)水中倒入Water ShieldTM（1：200稀釋）即可有效地預(yù)防滋生，效果可持續(xù)1個(gè)月左右。

Mycoplasma OffTM對(duì)許多細(xì)菌、病毒也有預(yù)防和殺滅作用。

二、細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的祛除

通常來(lái)說(shuō)，被污染的細(xì)胞應(yīng)該丟棄，以避免成為污染源。但對(duì)于珍貴的細(xì)胞，可使用Minerva Biolabs公司的Mynox®或Mynox Gold®。以往別的品牌的支原體清除劑，其實(shí)只是抑制劑，它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成，但無(wú)法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌，可與支原體膜特異性結(jié)合，破壞膜通透性，導(dǎo)致支原體膨脹破裂而死。使用Mynox®一般在2-3個(gè)小時(shí)即可完成清除任務(wù)。

Mynox Gold®是Mynox®的升級(jí)版，它通過(guò)四個(gè)療程產(chǎn)生作用。每個(gè)療程即細(xì)胞傳一代。它除了包括Mynox®，也包含復(fù)合抗生素成分。以往別的品牌的支原體清除劑只是針對(duì)支原體的抗生素成分，但也容易產(chǎn)生耐藥。Mynox Gold®將Mynox®和抗生素結(jié)合，即結(jié)合了二者的優(yōu)點(diǎn)，又去除了二者的不足，因?yàn)橛械募?xì)胞對(duì)Mynox®的治療不太適應(yīng)，而Mynox Gold®要比Mynox®更加溫和，對(duì)細(xì)胞的毒性效應(yīng)極小，因而更適用于脆弱的不太好養(yǎng)的細(xì)胞。

三、細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的預(yù)防

Zell ShieldTM直譯過(guò)來(lái)是細(xì)胞盾pai，它不僅能殺菌，還可抑制支原體的蛋白和DNA合成，因而能避免支原體的污染。使用時(shí)按1：100的比例加到培養(yǎng)基中，即可使用。它是復(fù)合抗生素成分，支原體耐藥的出現(xiàn)幾率很低。

四、細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的監(jiān)測(cè)

可使用MB公司出品的Venor® Gem系列，常用的是一步法試劑盒（Venor® Gem OneStep），它采用靈敏的PCR方法，能識(shí)別常見(jiàn)的至少二十七種支原體。所有試劑均在一管內(nèi)，為穩(wěn)定的凍干粉形式，用緩沖液溶解后可直接使用。細(xì)胞上清取2l即可完成支原體的篩查。

總之，支原體雖然發(fā)生率高，但可放可控。以上僅僅列舉的是實(shí)驗(yàn)室的情況，對(duì)于生物制藥企業(yè)，如果是病毒液中發(fā)現(xiàn)支原體的污染，也可以采用Mynox®進(jìn)行清除。總之，支原體的檢測(cè)和預(yù)防已成為一項(xiàng)常規(guī)操作，這對(duì)保障細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，是非常重要的。